Cand. scient. Marianne Østergaard Poulsen

Ph.d. studerende: Cand. scient Marianne Østergaard Poulsen

Projekttitel: Reversal of methicillin resistance in Staphylococcus aureus by thioridazine

Hovedvejleder: Professor, overlæge Hans Jørn Kolmos, Klinisk Mikrobiologisk Afdeling 

Projektvejleder: Post. doc. Janne Kudsk Klitgaard, Klinisk Mikrobiologisk Afdeling 

Medvejledere: Lektor Birgitte Kallipolitis, BMB, SDU, molekylærbiolog Marianne Nielsine Skov, Klinisk Mikrobiologisk Afdeling, OUH. 

Projektbeskrivelse:
Methicillin-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) giver anledning til stigende behandlings-problemer overalt i verden og der er stor mangel på effektive antibiotika. En alternativ potentiel behandlingsstrategi er at genskabe MRSA´s følsomhed overfor traditionelt effektive antibiotika som oxacillin og dicloxacillin. Thioridazin er et psykofarmakon, som har vist sig at kunne ophæve MRSA bakteriers antibiotikaresistens. Tidligere forsøg udført af vores forsker-team har vist, at kombinationen af thioridazin og oxacillin (en methicillin-analog) genskaber MRSA bakteriers følsomhed overfor oxacillin og medfører kimdrab in vitro. Resistensmekanismen i MRSA involverer to specifikke gener: mecA og blaZ. Vi har vist at kombinationsbehandlingen nedsætter genudtrykket fra disse to gener og at resistensmekanismerne derved ophæves. Disse studier er dog udført på blot et enkelt klinisk MRSA isolat. Det skal derfor i projektet klarlægges, om den resistensreverserende effekt af thioridazin er et generelt fænomen. Til dette formål undersøges, om kombinationen af thioridazin og oxacillin kan anvendes mod kliniske MRSA isolater af forskellig epidemiologisk afstamning. Vi vil endvidere anvende nematoden C. Elegans som modelorganisme med henblik på at undersøge den kliniske relevans af kombinationsbehandlingen. Vi ønsker at anvende en stereoisomer af thioridazin, som ikke genkendes af humane celler og som dermed ikke er toksisk. Vi vil ydermere undersøge den molekylære baggrund for effekten af thioridazin og oxacillin på bakterierne ved hjælp af gen-analyser såsom bl.a. primer extension, Northern og Western blotting. Thioridazin og oxacillins effekt på MRSA´s cellevæg vil blive undersøgt ved hjælp af morforlogi studier og assays til måling af cellevæg biosyntese. Thioridazin i kombination med oxacillin nedsætter som tidligere nævnt genudtrykket af mecA, som koder for det penicillin bindende protein 2A (PP2A). Vi vil ved hjælp af flourescence mikroskopi og enzyme assays undersøge, om kombinationsbehandlingen også ændrer lokaliseringen og/eller aktiviteten af PP2A. Vores vurdering er, at dette projekt kan skabe nye resultater, som ikke blot har stor grundvidenskabelig interesse, men som på længere sigt kan få stor betydning for behandling af probleminfektioner med multiresistente bakterier.